液相色譜儀色譜峰保留時間不重現可能由多種因素引起,通常還會影響到峰面積的重現性,建議檢查以下幾個方面:
1、確認流動相是新鮮配制的,比例沒有錯誤。比如一些揮發性的溶液,如乙酸,最好及時更換。
2、確認液相色譜條件在色譜柱使用范圍之內,如 pH 范圍、溫度、壓力。
3、仔細觀察柱前壓的變化,如果壓力穩定,就可以判斷泵的系統沒有問題;如果是壓力不穩定,一定會影響保留時間,這種狀況通常是由于泵頭里有氣泡造成的。請將流動相仔細脫氣,并排出泵內氣泡。
4、觀察色譜峰形、柱效變化情況,確認色譜柱是否被污染,如果確定色譜柱污染,可嘗試使用適當溶劑沖洗。
5、如果同時伴有色譜柱柱壓升高,解決方法請參見“液相色譜柱柱壓升高”部份。
6、如果使用梯度洗脫方法,請確認平衡時間足夠長。流動相中使用離子對試劑(烷基磺酸鈉等)或固定相為正相硅膠等,往往需要更長的平衡時間。
7、確認樣品是否過載,減少進樣量(進原進樣量的 10%確認)。
8、組分在液相色譜柱中保留不夠。調整色譜條件,使樣品在柱上適當保留。