液相色譜儀流動相暴露于實驗室環境時,溶劑與大氣氣體平衡。在混合溶劑時,空氣的溶解度低于純溶劑的相同比例,并且過量的空氣會趨于鼓泡,可能會形成氣泡。氣泡會增加基線的噪音,造成靈敏度下降,甚至無法分析(噪聲增大,基線不穩,突然跳動)。溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化,柱中固定相(如烷基胺)發生反應,降解而改變柱的分離性能。溶解氧能與某些溶劑(如甲醇、四氫呋喃)形成有紫外吸收的絡合物,此絡合物會提高背景吸收(特別是在260nm以下),并導致檢測靈敏度的輕微降低,會在梯度淋洗時造成基線漂移或形成鬼峰(假峰)。若用FLD(熒光檢測器),溶解氧在一定條件下還會引起淬滅現象,特別是對芳香烴、脂肪醛、酮等。在某些情況下,熒光響應可降低達95%。
液相色譜儀流動相脫氣的作用
除去其中溶解的氣體(如O2),以防止在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時,因壓力降低而產生氣泡。
排出氣泡能減少泵工作的傷害,提高UV檢測器的性能高,改善靈敏度。液相色譜儀流動相脫氣的方式
加熱回流法:效果較好,但操作復雜,且有毒性揮發污染,同時需要考慮低沸點溶劑揮發造成的組成變化。
抽真空脫氣法:易抽走有機相。
超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中(一般500ml溶液需超聲20~30min),此法不影響溶劑組成。超聲時應注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸,以免玻璃瓶破裂,容器內液面不要高出水面太多。
氦氣脫氣法:在色譜操作前和進行時,將惰性氣體噴入溶劑中。嚴格來說,此方法不能將溶劑脫氣,它只是用一種低溶解度的惰性氣體(通常是氦)將空氣替換出來。主要利用液體中氦氣的溶解度比空氣低,連續吹氦脫氣,效果較好,但成本高。
在線真空脫氣法:利用在線脫氣機在線脫氣,智能控制,無需額外操作,成本低,脫氣效果明顯優于以上幾種方法,并適用于多元溶劑體系。