高效液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一,其應用越來越廣泛,色譜柱作為高效液相色譜儀的重要組成部件,在分析檢測中能否較好的分離和測定其性能起到關鍵性的作用,同時也是最主要的耗材。從降本增效方面考慮,延長其使用壽命就顯得尤為重要。我們需要主要注意以下幾點:
一、加裝保護柱
色譜柱作為高效液相色譜儀的主要耗材,價格國產的在1000元左右,進口的像資生堂大都在2000-3000元,保護柱套(一次性投資)價格在600-800元,柱芯平均一個在100-200元,隨著做樣次數的增加色譜柱不可避免的出現柱效下降,分離度降低,為了延遲出現這種情況,最直接有效的方法就是加裝預柱。
二、經常清洗
柱子在做樣過程中難免會被樣品帶入的雜質污染流動相大多為緩沖鹽溶液,如果不及時清洗就會留在柱子當中,結晶難以清洗,建議每次清洗時間不少于2小時,最后保存在100%的甲醇或者乙腈當中。
做樣時間長了以后一些不溶物和難溶物會附著在整個流路當中,或多或少會隨著流動相被沖洗到色譜柱當中滯留其中,所以對色譜儀也要定期進行清洗,根據檢測物質的不同用相應的試劑進行清洗。
三、流動相過濾
流動相大多用鹽溶液配制,不可避免的有少量不溶物,如果不過濾,一些微小的顆粒物質就會進入色譜柱,時間一長就會造成色譜柱堵塞,根據所用色譜儀管路直徑的大小選擇合適的濾膜,一般是0.45μm,有些進口儀器需要用0.22μm。
四、使用進口試劑
進口試劑雜質少,不會污染色譜柱。
五、做樣前后要徹底清洗
做樣前由于色譜柱內甲醇或乙腈長時間放置,所在開機進行沖洗時,流速不要太大,建議用0.5ml/min的流速進行過渡。
做樣后色譜柱內殘留大量流動相和樣品帶入的雜質(參照第二條)。
六、選擇合適的方法
不同的檢測項目有對應不同的方法,在樣品預處理過程在保留目標物質的前提下盡量將雜質去除干凈,這樣不僅可以保護整個流路系統,而且也降低了雜質對目標峰的干擾,進而可以提高檢測的準確度。
七、色譜柱拖尾
色譜柱拖尾一般是柱頭污染,具體做法如下:
1、將柱子入口(拖尾首先會污染入口)污染部分的填料去掉,盡量多去掉一些,把污染的填料全部去除;
2、去除的時候要用干凈的工具,個人建議用一次性注射器;
3、經過修復的色譜柱,在使用前一定要做回收率測試,達到國標要求的80-110%,不對稱因子為0.90-1.15方可投入使用。
八、檢測及清洗用水
作為反相色譜用到最多的就是水,因此水的潔凈程度也是影響色譜柱使用壽命的重要因素,建議用桶裝的娃哈哈純凈水,如果用量較大可以考慮用純水機制備超純水(過濾后的超純水建議在4小時內用完)。
九、色譜柱色譜峰前延
這種情況下柱子基本報廢了,無法修復。報廢的柱子也要充滿100%的有機溶劑,卸下以后兩端用堵頭堵死,柱內未污染的填料可以用來修復拖尾的色譜柱。