由于高效液相色譜儀(HPLC)具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。因為高效液相色譜儀都是一些很精密的儀器,有些溶劑和樣品在進樣之前,可能里面有些雜質或者不溶的東西,如果不用微孔濾膜過濾的話,這些東西進去可能會對儀器造成傷害,會出現堵塞柱子之類的問題。對流動相過濾必不可少。
流動相溶劑和樣品過濾非常重要,它會對色譜柱、儀器起到保護作用,消除由于污染對分析結果的影響。常用液相色譜儀流動相和樣品溶液過濾方法有兩種,分別是溶劑過濾器和過濾頭。
溶劑過濾器的原理和方法是利用濾膜過濾流動相溶液中的雜質,使用真空泵加快過濾的速率。其中,起關鍵性作用的就是濾膜,濾膜分為有機和水系這兩種,濾膜種類的選擇根 據過濾流動相溶液的性質而不同。 水系濾膜適用于水基溶液,不耐有機溶劑,具有較高的化學和熱穩定性,流速快、耐酸堿能力強,具有高機械強度,對蛋白質吸 附力較低。有機濾膜為疏水性濾膜,適用于有機溶劑及空氣過濾。耐酸耐堿,抗氧化劑。耐高溫,強度好,化學性能穩定。不僅適用于含有酸堿性的水溶液,更適用 于含有有機溶劑,如醇類、烴類、脂類、酚類、酮類等有機溶劑。
溶劑過濾器長期用于過濾溶劑中的雜質,溶劑的質量或污染以及藻類的生長會堵塞溶劑過濾器,從而影響泵的運行,尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液。為有效防止溶劑瓶 內溶劑過濾器的堵塞,在使用過程中須嚴格執行溶劑過濾,避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下,盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液,存放多日的蒸餾 水及磷酸鹽緩沖液不宜使用。
過濾頭用于液相色譜儀樣品進樣系統,一般與注射器結合使用,使用方法是在注射器攝入適量樣品溶液之后,將過濾頭安裝在注射器進口處,在注射器向儀器進樣口中注射樣品溶液時即可起到過濾的作用。
過濾頭堵塞會影響過濾速率和效果,測試過濾頭是否堵塞,可以將過濾頭從瓶蓋組件處拔下,使管線中充滿溶劑,如果過濾頭沒有堵塞,溶劑會自由滴出;如果過濾頭已經堵塞,則沒有溶劑或只有很少的溶劑滴出。過濾頭堵塞后的處理方法是 將過濾頭從組件中取下,在濃硝酸(35%)中浸泡1h,然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。不銹鋼材料的過濾頭是可以超聲清洗,玻璃材料的過濾頭發生堵 塞,不推薦超聲清洗,因為超聲很容易破壞玻璃過濾頭的過濾板,只推薦用稀硝酸(35%左右)浸泡,浸泡大約一個小時后,再用水洗凈過濾頭。
氣泡的產生會使液相色譜儀峰面積重復性不好,靈敏度下降,壓力升高等,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣,提高實驗精度。